驚艷登場！臨床級治療性病毒載體生產(chǎn)必備轉(zhuǎn)染試劑—PEIpro?-GMP

2018年3月13日南京傳奇生物科技有限公司的LCAR-B38M CAR-T自體回輸制劑臨床申請獲批，成為中國首個(gè)獲批的CAR-T療法。隨著新病毒載體系統(tǒng)的進(jìn)一步開發(fā)，一些基于基因和細(xì)胞的療法距離獲得臨床批準(zhǔn)和遺傳疾病治療的商業(yè)化應(yīng)用又更進(jìn)了一步。使用正確的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法對病毒載體生產(chǎn)至關(guān)重要，以確保從工藝開發(fā)到高質(zhì)量級別病毒載體生產(chǎn)的靈活性和可重復(fù)性。

法國Polyplus-transfection^?提供一系列基于PEI的高品質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑， 研發(fā)級PEIpro^?可用于工藝開發(fā)過程中建立病毒載體生產(chǎn)體系，臨床前級PEIpro^?-HQ和最高質(zhì)量級別即完全GMP級別的PEIpro^?-GMP可用于臨床病毒載體的生產(chǎn)，滿足細(xì)胞治療和基因治療的質(zhì)量要求。

PEIpro^?-GMP是最高質(zhì)量級別的PEI，是市場上唯一提供帶有MPC連接器和焊接管的袋裝轉(zhuǎn)染試劑，非常適用于制造符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的臨床級治療性病毒載體（如AAV和慢病毒）的封閉生產(chǎn)系統(tǒng)。使用PEIpro^?或PEIpro^?-HQ建立的大規(guī)模轉(zhuǎn)染方案可確保與PEIpro^?-GMP的無縫銜接，可用于制造治療性病毒載體和后期臨床試驗(yàn)的商業(yè)化。

表1.Polyplus-transfection^?提供一系列不同級別PEIpro^?，滿足從工藝開發(fā)、臨床前、到臨床級別病毒載體的生產(chǎn)需求

圖1. 使用不同級別PEIpro^?，可重復(fù)獲得相似的病毒滴度

將懸浮液HEK-293T細(xì)胞以1×10 ⁶ cells/ mL的密度接種在FreeStyle^TM F17培養(yǎng)基中，并按照相同方案，分別用PEIpro^?，PEIpro^?-HQ和PEIpro^?-GMP試劑轉(zhuǎn)染。用Helper Free Packaging System（Cell Biolabs）生產(chǎn)AAV，轉(zhuǎn)染后72h，通過檢測GFP報(bào)告基因表達(dá)來檢測病毒滴度。

PEIpro^?系列產(chǎn)品優(yōu)勢多多，一起來扒一扒~

• 經(jīng)優(yōu)化的線性聚乙烯亞胺（PEI），毒性更低，轉(zhuǎn)染效率更高

圖2. PEI聚合物化學(xué)性質(zhì)的優(yōu)化

由于長片段的PEI對細(xì)胞有毒性，而短片段PEI結(jié)合DNA能力較差（見紅色），所以優(yōu)化PEI的片段大小，降低其分散性能減少細(xì)胞毒性，同時(shí)增加結(jié)合DNA的能力（見藍(lán)色）和轉(zhuǎn)染重復(fù)性。

• 高滴度病毒生產(chǎn)的最佳選擇

表2. PEIpro^?是采用貼壁或懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系生產(chǎn)病毒的最佳選擇

不管細(xì)胞培養(yǎng)體系和生產(chǎn)規(guī)模如何， PEIpro^?和PEIpro^?-HQ 均可獲得較高的病毒產(chǎn)量，慢病毒的病毒滴度超過10⁷IG/mL，而AAV的病毒滴度超過10⁹ VG/mL。

• 與其它PEIs相比，PEIpro^?所需更少轉(zhuǎn)染試劑和較少/相似的DNA用量

圖3.與其它PEIs相比，PEIpro^?所需更少轉(zhuǎn)染試劑和較少/相似的DNA用量

懸浮HEK-293以1×10⁶cells/mL的密度接種在無血清培養(yǎng)基中，使用重懸后濃度為1 mg/mL的PEIpro^?、PEI “Max” 和L-PEI 25 kDa (Polysciences, Warrington, PA)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。采用常規(guī)熒光素酶測定法在轉(zhuǎn)染后48h測定熒光素酶的表達(dá)

• 與磷酸鈣相比能得到更高病毒滴度

圖4.PEIpro^?與磷酸鈣相比能得到更高的病毒滴度

無血清培養(yǎng)體系培養(yǎng)HEK-293細(xì)胞，并產(chǎn)生慢病毒。每75 cm²燒瓶加入15 μg DNA和30 μl PEIpro^?，轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，用流式細(xì)胞術(shù)檢測上清中的病毒滴度。

• 批次間有很好的穩(wěn)定性和可重復(fù)性

圖5.使用不同批次PEIpro?生產(chǎn)蛋白的得率具有極佳的重復(fù)性

懸浮HEK-293細(xì)胞以1×10⁶cells/mL 密度接種在無血清培養(yǎng)基中，按照PEIpro^?標(biāo)準(zhǔn)操作流程進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染48h后采用 protein G親和定量 (HPLC)法來檢測IgG3-Fc的產(chǎn)量。

產(chǎn)品信息

Polyplus-transfection^?，中文名保利嘉，是來自法國的一家專注核酸轉(zhuǎn)染的生物技術(shù)公司。因?yàn)閷Ｗ⑺詫I(yè)，其產(chǎn)品適用于體內(nèi)和體外轉(zhuǎn)染，包括DNA、siRNA及其他寡核苷酸、蛋白和多肽轉(zhuǎn)染。高效率、低毒性、操作簡便和高性價(jià)比的產(chǎn)品受到廣大科研工作者喜愛，廣泛應(yīng)用于基因功能研究、蛋白生產(chǎn)、病毒包裝和動(dòng)物模型的構(gòu)建。公司于2002年獲得ISO 9001證書。